李万根1
广州医学院第二附属医院
目的 1. 观察高糖对内皮细胞NF-кB表达、总SOD活性及MDA含量的影响;2. 探讨恢复正常糖和加用α-硫辛酸后,上述指标的变化。方法 1. 取正常新生儿脐带进行HUVECs原代培养;2. 将培养成功的HUVECs在正常糖,高糖(11.0 mmol/L 、25.0mmol/L、33.0 mmol/L D-葡萄糖)下培养5天,选取适当的高糖干预浓度;3. 取第3代对数生长期HUVECs进行干预。第一部分:观察高糖对HUVECs的影响,分2组:N组、H组,干预72h后,检测NF-кB表达量、总SOD活性及MDA含量。第二部分:观察不同时间高糖对HUVECs的影响,分2组:H24h组、H72h组,分别干预24h/72h后,检测指标。第三部分:观察高糖或同时给予α-硫辛酸对HUVECs的影响,分3组:N组、H组、Hα组,24小时后进行指标检测。第四部分:观察高糖干预72h后转至正常糖或同时给予α-硫辛酸对HUVECs的影响,分3组:N-N组、H-N组、H-Nα组,24小时后进行指标检测。采用共聚焦显微镜下观察荧光分布;免疫荧光细胞技术检测NF-кB;分光光度法检测并计算出总SOD活性、MDA含量。结果 1. 原代培养的内皮细胞成典型的铺石路样改变。2. 葡萄糖浓度为25.0mmol/L为最佳干预浓度。3. 第一部分:NF-кB表达量H组显著高于N组(P<0.01);总SOD活性H组显著低于N组(P<0.01);MDA含量H组显著高于N组(P<0.01)。第二部分: NF-кB表达量H72h组显著高于H24h组(P<0.05);总SOD活性H72h组显著低于H24h组(P<0.05);MDA含量H72h组显著高于H24h组(P<0.05)。第三部分:三组NF-кB表达量、总SOD活性和MDA含量无显著性差异。第四部分:H-Nα组NF-кB表达量、总SOD活性与N-N组比较无显著性差异;NF-кB表达量H-N组显著高于N-N组(P<0.01);总SOD活性H-N组显著低于N-N组(P <0.01);MDA含量H-N组显著高于N-N组(P<0.01)。结论 1. 高糖环境能诱导HUVECs NF-кB表达、降低总SOD活性及增加MDA含量; 2. 纠正高糖并加用α-硫辛酸可以使NF-кB表达、总SOD活性及MDA含量完全恢复到正常水平。