应长江,  李伟
徐州医学院附属医院内分泌科

目的（1）尾静脉注射腺相关病毒介导的血管抑素(adeno-associated virus- angiostatin ,rAAV-AS)，观察rAAV-AS对糖尿病肾病大鼠肾脏的作用，探讨rAAV-AS 在糖尿病肾病大鼠肾脏是否能够稳定表达。（2）观察糖尿病肾病大鼠肾组织中转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）和血管内皮生长因子(Vessel endothelium growth factor ,VEGF)的表达，探讨腺相关病毒介导血管抑素对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1和VEGF表达的影响。
方法 清洁级SD(Sprague- Dawley)雄性大鼠随机分为4组：正常组（NC组，n=10），糖尿病肾病组（DN组, n=10），腺相关病毒空载体组（rAAV-0, n=10）,腺相关病毒介导的血管抑素组（rAAV-AS，n=10 ， 2 ×1012VG /kg BW）；链脲佐菌素（streptozotocin ,STZ）60mg/kg腹腔注射诱导糖尿病模型，72h后尾静脉测血糖≥16.7mmol/L，说明造模成功，喂养一周，选入本实验；尾静脉注射rAAV-AS,6周末检测各组大鼠的体重(body weight,BW)、血糖（blood glucose,BG），糖化血红蛋白（hemoglobin A1c ,HbA1c）、尿素氮（blood urea nitrogen ,BUN）血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿微量白蛋白(miscroalbunminuria,MAU)、肾重(kidney weight,KW)及肾指数（kidney index,KI），光镜观察大鼠肾组织结构，免疫组化法检测TGF-β1、VEGF的表达变化。Western blot 检测血管抑素表达情况。
结果 （1）与NC组比，DN组的KI、MAU、BUN、Scr 、Glu、HbA1c明显增高，差异有统计学意义（P < 0.05 ）；rAAV-AS治疗后MAU、BUN、Scr明显增高，差异有统计学意义（P < 0.05 ）。 （2）免疫印迹法结果：与NC组比较，DN组基本不表达AS，差异有统计学意义(P< 0.05)；rAAV-AS治疗后，大鼠肾组织中AS表达明显增多，差异有统计学差异(P< 0.05)。（3）肾组织病理学变化：DN组肾小球细胞数显著增多，毛细血管袢塌陷,管腔闭塞,肾小球体积增大,淋巴细胞数量增多；肾小管尤其是近曲小管肿胀、变性、空泡形成,肾间质可见大量淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润。rAAV-AS治疗后，AS组病变明显减轻。（4）免疫组化结果：与NC组相比，各组的TGF-β1和VEGF表达明显增多，差异有统计学意义（P < 0.05 ）；rAAV-AS治疗后，与DN组比较，AS组TGF-β1和VEGF表达减少，差异有统计学意义（P < 0.05 ）。(5)Western blot 结果：DN组血管抑素表达减少，rAAV-AS治疗后血管抑素表达增加。（6）腺相关病毒空载体组与DN组各指标间差异无统计学意义（P > 0.05 ）
结论 （1）尾静脉注射一定剂量（2 ×1012VG /kg BW）的腺相关病毒介导的血管抑素对大鼠糖尿病肾病具有保护作用，且这种保护作用不依赖于血糖的降低；（2）腺相关病毒介导的血管抑素可以在肾组织中持续表达；（3）血管抑素可能通过降低糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、VEGF表达，而起到肾脏保护作用。