脂联素表达的影响
重庆医科大学附属第二医院内分泌科(400010)
杨刚毅 李 伶 孟凡萍 李 钶

目的 构建携带小鼠脂联素（Acrp30）shRNA（短发夹RNA）腺病毒载体，将该重组腺病毒感染诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，检测Acrp30 siRNA是否能有效抑制脂肪细胞脂联素的mRNA和蛋白的表达。
方法 首先用KpnⅠ+NotⅠ双酶切本课题组前期构建的质粒pSilencer1.0-U6-Acrp30-1，和pSilencer1.0-U6-Acrp30-3，得到目的片断U6-Acrp30-1，和U6-Acrp30-3，再将鼠U6启动子和脂联素Acrp30 siRNA的cDNA克隆入穿梭质粒pshuttle，卡那霉素抗性筛选阳性重组子，双酶切并测序鉴定正确后，将重组子用PmeⅠ线性化后电穿孔入电转化感受态细胞BJ5183，与pAdeasy-1在BJ5183内同源重组，PacⅠ消化鉴定产生30kb和4.5kb或3.0kb的为阳性重组子，将阳性重组子在超感受态菌XL10-Gold中扩增重组腺病毒质粒后，PacⅠ消化，脂质体介导转染AD293细胞，包装扩增携带脂联素Acrp30的siRNA重组腺病毒。用重组腺病毒感染诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，检测脂肪细胞脂联素的mRNA和蛋白的表达。
结果 成功构建并鉴定了小鼠ACRP30 基因特异性shRNA腺病毒载体，该载体感染脂肪细胞后，能显著抑制其Acrp30 mRNA和蛋白表达。
结论 构建的Acrp30 基因特异性shRNA腺病毒载体能有效的抑制脂联素基因在3T3-L1脂肪细胞中的表达，为进一步研究脂联素的生理功能提供了一个新的技术平台。