四川大学华西医院内分泌科  610041
四川大学华西医院内分泌代谢病研究室  610041
陆志明 余叶蓉 张祥迅

目的：本研究旨在研究FFA对大鼠主动脉局部NADPH氧化酶P47-phox亚基基因转录与翻译诱导作用及其机制，并揭示高FFA血症导致内皮依赖性血管舒张功能损伤与血管局部。
研究方法：正常6周龄雄性S-D大鼠随机分为三个组：对照组（NC组）静脉输注生理盐水；实验组（FFA组）输注脂肪乳及肝素；干预组（FFA+GSH组）同时输注脂肪乳、肝素及GSH。每组实验大鼠按输液时间分为6h、12h、18h、24h亚组。输液前后取血分别测定血浆FFA水平及GSH/GSSG比值。输液结束后，处死大鼠取主动脉弓以下胸主动脉①作血管局部PKC活性检测；②提取RNA作实时荧光定量RT-PCR检测NADPH氧化酶P-47phox亚基基因的转录水平，③同时将内皮细胞及平滑肌细胞匀浆后经western blot检测P-phox47亚基的蛋白表达。④行超声多普勒检测股动脉内皮依赖性血管舒张功能和非内皮依赖性血管舒张功能。
研究结果：FFA组输液后血浆FFA水平较输液前明显增加，血浆GSH/GSSG比值逐渐下降，在输注18小时后降至最低值(输液前83.0±2.4 vs. 输液18小时后41.3±3.9 , P<0.05)。而NC组输液前后血浆FFA浓度与GSH/GSSG比值均无明显变化。FFA+GSH组输液后FFA增高趋势较缓，在输液18小时后与FFA组比较血浆FFA水平差别有统计学意义(FFA+GSH组输液后：831.6±57.8 mmol/L vs FFA组输液后：1562.5±225mmol/L, P<0.01)，血浆GSH/GSSG比值下降的趋势部分抑制（FFA+GSH:62.1±2.3 vs. FFA组：41.3±3.9, P<0.05）。FFA组NADPH氧化酶P-47phox亚基基因转录及表达增加，其相对拷贝数较对照组增加约4倍，而该基因转录及表达增加趋势在FFA+GSH组中受到明显抑制,基因拷贝数仅为FFA组的1/2。NADPH氧化酶P-47phox亚基转录与翻译激活与血浆GSH/GSSG比值下降具有相关性。超声多普勒检测显示：FFA组内皮依赖性血管舒张功能较NC组明显降低（P<0.01），而FFA+GSH组内皮依赖性血管舒张功能较FFA组显著改善(P<0.05)。非内皮依赖性血管舒张功能三组间无差别。三组大鼠乙酰胆碱刺激下最大血流频率与血浆GSH/GSSG比值相关分析显示：二者呈正相关关系（r=0.907,  P=0.01）。
研究结论：外源性升高血浆FFA水平能诱导机体氧化应激状态，促进血管局部NADPH氧化酶P-47phox亚基基因的转录与翻译，加重血管局部氧化应激损伤，产生病理损伤的叠加作用。阻断高FFA血症导致的氧化应激能抑制主动脉NADPH氧化酶表达，部分恢复内皮依赖性血管舒张功能，提示高FFA血症导致血管功能损伤与氧化应激有关。